Optimizing recombinant antibodies for intracellular function using hitchhiker-mediated survival selection
Conference proceedings article
ผู้เขียน/บรรณาธิการ
กลุ่มสาขาการวิจัยเชิงกลยุทธ์
ไม่พบข้อมูลที่เกี่ยวข้อง
รายละเอียดสำหรับงานพิมพ์
รายชื่อผู้แต่ง: Waraho-Zhmayev D., Meksiriporn B., Portnoff A.D., DeLisa M.P., Bradbury A.
ผู้เผยแพร่: Oxford University Press
ปีที่เผยแพร่ (ค.ศ.): 2014
Volume number: 27
Issue number: 10
หน้าแรก: 351
หน้าสุดท้าย: 358
จำนวนหน้า: 8
นอก: 1741-0126
eISSN: 1741-0134
ภาษา: English-Great Britain (EN-GB)
ดูในเว็บของวิทยาศาสตร์ | ดูบนเว็บไซต์ของสำนักพิมพ์ | บทความในเว็บของวิทยาศาสตร์
บทคัดย่อ
The 'hitchhiker' mechanism of the bacterial twin-arginine translocation pathway has previously been adapted as a genetic selection for detecting pairwise protein interactions in the cytoplasm of living Escherichia coli cells. Here, we extended this method, called FLI-TRAP, for rapid isolation of intracellular antibodies (intrabodies) in the single-chain Fv format that possess superior traits simply by demanding bacterial growth on high concentrations of antibiotic. Following just a single round of survival-based enrichment using FLI-TRAP, variants of an intrabody against the dimerization domain of the yeast Gcn4p transcription factor were isolated having significantly greater intracellular stability that translated to yield enhancements of >10-fold. Likewise, an intrabody specific for the non-amyloid component region of a-synuclein was isolated that has ∼8-fold improved antigen-binding affinity. Collectively, our results illustrate the potential of the FLI-TRAP method for intracellular stabilization and affinity maturation of intrabodies, all without the need for purification or immobilization of the antigen. © The Author 2014. Published by Oxford University Press. All rights reserved.
คำสำคัญ
Antigen-binding affinity, Intracellular antibody engineering, Protein folding and stability, Twin-arginine translocation
ติดต่อสอบถามเพิ่มเติมได้ที่